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BD 細胞磁珠分選技術

時間:2017-08-22 09:53:47 瀏覽:

實驗原理:

免疫磁珠法分離細胞是,在外加磁場中,通過抗體與磁珠相連的基于細胞表面抗原能與連接有磁珠的特異性單抗相結合細胞被吸附而滯留在磁場中,無該種表面抗原的細胞由于不能與連接著磁珠的特異性單抗結合而沒有磁性,不在磁場中停留,從而使細胞得以分離。 

BD IMag TM Cell Separation System 是利用磁性細胞分離裝置:BD IMagnet TM ( 貨號:552311) 來分離細胞的系統。 不需要利用 Column,只要利用圓底管 (round-bottom tube) 及「Direct Magnet Technology」的技術,就可簡單、 有效率地在短時間內來分離出想要的細胞。與其他類似產品相比,可得到較佳的純度及回收率。


免疫磁珠法分為正選法和負選法:

正選法:磁珠結合的細胞就是所要分離獲得的細胞

負選法:磁珠結合不需要的細胞,游離于上清液的細胞為所需細胞

磁分離細胞的重要指標是:純度和得率,這取決于磁珠所連接單抗的特異性,磁珠大小(磁性)以及分選方式(正選法以及負選法),太小的磁珠得率不高,太大的磁珠又會影響細胞活性,也無法直接上流式。純度:正選>負選,得率負選>正選


二抗磁珠試劑

若找不到帶有想要特殊標記抗體的磁珠試劑,可以利用其一抗(primary antibody)和帶有磁珠的二抗 (secondary  antibody),間接與想要分離的細胞接合,再以磁力架 (BD IMagnet) 進行細胞分離。例如: Biotin 一抗和二抗磁珠試劑 Streptavidin Particles Plus – DM ( 貨號:557812) 配合使用;帶有 PE 熒光的一抗可與二抗磁珠試劑R-Phycoerythrin (PE) Magnetic Particles - DM ( 貨號:557899) 配合使用。


常見問題

1.IMag  Particles-DM可用Column式的磁珠分離裝置來進行實驗嗎?
BD TM IMagnet 和 Column 式的磁珠分離裝置磁力強度有異,所以 IMag Particles-DM 無法用 Column 式的磁珠分離
裝置來進行分離實驗。

2.在進行BD  IMag 實驗時,一次最多可以進行多少細胞數的分離?

約 1.2X10 9 cells。

3.在進行BD IMag 實驗時,適合采用的圓底管是?

BD 原廠建議使用 BD Falcon,Polystyrene ( PS ) 材質的圓底管。若不是使用 Polystyrene 材質的圓底管來進行實驗,
可能會使細胞回收率降低。

4.BD  IMag系列的磁珠大小及材質為何?

直徑 100-450nm,外面包覆著 Dextrin 的氧化鐵。

5.BD  IMag與其他品牌比較的優點是?

目前市面上主要有兩種磁珠分離系統:

small particle系統:磁珠半徑約50nm,優點是: 不影響后續細胞培養,可直接用流式細胞儀檢測,不會對散射光有影響。
缺點是: 需要磁力較強的磁鐵來進行分離;分離速度較慢,回收率較低; 需要一次性的 column,不能在一般試管中進行,成本較高。

large particle系統:磁珠半徑1200-4500nm,優點是:操作簡單,可在一般 PS 試管中完成;分離速度較快,回收率較高;成本較低。

缺點是:可能會影響后續細胞培養;可能會不利于流式細胞儀檢測,造成管路阻塞; 純度較低。



BD IMag 與其他品牌比較的優點是?

磁珠大小介于兩種之間結合以上兩者的優點:操作簡單,可直接在PS試管中完成;不影響后續細胞培養;分離后可直接用流式細胞儀檢測;分離速度快,純度及回收率高;成本低。

 




BD細胞磁珠分離系統簡介



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